Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现呼吸道自身血清到显现1型式高血压诊断征状的令人满意率在儿童中后期就有很好的揭示，多个呼吸道自身血清白血病的儿童中的有70%在血清转换后10年内中风高血压，而随访15年的儿童这一%-提高到84%。相比较之下，分之二诊断1型式高血压一半以上的型式1型式高血压的肺癌机制还无法得到合理的研究成果。

越来越多的人开始用于依此系统来界定1型式高血压的令人满意：个体在显现多种呼吸道自身血清时进入第1阶段，显现血糖异常时进入第2阶段，显现征状时进入第3阶段。一些多发呼吸道自身血清白血病的个体，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为肺癌的1型式高血压。我们先前揭示了一组在首次监测到多种呼吸道自身血清样本后至极多10年无高血压的极慢令人满意者，这组患儿人数极多，但不同之处非常完全一致。随后，我们注意到呼吸道自身血清选择性CD8+T细胞膜底物在令人满意加速的患儿中的基本不实际上，但在同类型肺癌和仍然实际上的高血压患儿中的很容易监测到。这可能证明，与令人满意患儿相比较，这些患儿化脓性底物的缓冲增强。

早期研究成果证明，尽管缓冲性T细胞膜(Treg)数量正常，但高血压患儿实际上一些功能性缺陷，其中的包括对IL-2的底物能力降低。此外，高血压患儿中的的effectCD4+T细胞膜可能对缓冲突显抵抗性，乏善可陈为effectT细胞膜的可抑制消散，自然产生的Treg和体外产生的正向Treg，以及血清经历的CD4+T细胞膜中的IL-2底物消散。本研究成果的目的是揭示了CD4+缓冲性T细胞膜(Treg)在一小群极加速令人满意者中的的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以人群为基础的横向研究成果，在21岁此表确诊的患儿亲属中的检验1型式高血压的危险因素。我们先前揭示了仍然加速令人满意者的不同之处，他们保有多重呼吸道自身血清白血病大约10年，但无法显现高血压的诊断征状，慢性或非来进行性化脓性。随后，10名继续保有无高血压并乐意提供大量血液样本的加速令人满意者纳入T和B细胞膜功能性分析。在目前的研究成果中的，8名慢令人满意者(SP组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的呼吸道自身血清白血病。所有的发起者都受制于1型式高血压令人满意的1期，尽管一些人随后耗尽了呼吸道自身血清对某些血清的白血病底物，然而，一名患儿已经受制于2期至极多6年，但无法显现诊断征状，一名患儿被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该NADP来进行了单独评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜奥义和T细胞膜可抑制检验评估NADP中的Treg的增益、遗传式和功能性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和回归)来进行无监督聚类分析，评估Treg遗传式。

结果：与肥胖症NADP相比较，来自慢令人满意体的无意识CD4+T细胞膜的监督聚类推测，激活命的无意识CD4+ Treg增益提高，与免疫抑制正向的TNFR相关蛋白(GITR)强调提高有关。一名HbA1c上升时的患儿与令人满意加速者和给定的对照组相比较，Treg谱略有不同。功能性分析证明，与肥胖症NADP相比较，来自加速令人满意体的Treg介导的CD4+effectT细胞膜可抑制显着毁坏。乏善可陈为对effectCD4+T细胞膜CD25和CD134强调的可抑制提高。

三幅1 全面性的遗传式分析推测，CD4+Treg冠状病毒式在慢令人满意队列中的提高。由FlowSOM填充的Treg室，有数在来自所有NADP的活命CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示出物强调鉴定出10个元簇:无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个不同Treg标示出填充的10个元簇的MST。每个数据流值得一提的是一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在数据流组周围上色。每个数据流中的的甜品三幅暗示单个标示出的强调档次。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整体标示出强调。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)填充三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较丰度为每个metacluster箱该线三幅(丰度> 0.05%)断定为HD和SP组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞膜(l)。黄色左上方值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模型式证实，Treg增益的提高是令人满意加速的logo。分级相关联(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和给定的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的指标性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调来进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)组以及NADPSP 606(黄色)中的CD25+ cd127的增益汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联叔父集的箱该线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，对角突出的簇被识别为SP和HD队列两者之间的不同。(j)箱该线三幅推测了在SP(斑点)和HD(灰点)组中的，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比较丰度(%-)。(k)直方三幅推测每个簇的遗传式(红色)和Treg标示出相比较强调与背景强调(红色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中的标示出的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验

三幅3 与肥胖症献血者相比较，令人满意加速者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T细胞膜元簇(无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个强调标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR强调串联，推测直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon相加符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有NADP包括，p< 0.05(红色)NADPSP 606和给定的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR强调，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(黄色)串联，推测直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检验

三幅4 来自加速令人满意的CD4+ treg细胞膜掌控effectCD4+T细胞膜的能力降低。SP组用红色的该线和左上方暗示，HD组用黑色的该线和左上方暗示，黄色的该线/左上方暗示NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示出为CFSE, Treg按捕捉到的%-底物物。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，养成3天后来进行流式细胞膜奥义监测。(a-d)与CD4+需要的话者相比较应当的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者养成。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。用于白血病对照(激活命的声势浩大当细胞膜不含treg)计算可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 effectCD4+T细胞膜对加速令人满意的T细胞膜再造的可抑制更敏感。SP组用红色的该线和左上方暗示，HD组用黑色的该线和左上方暗示，黄色的该线/左上方暗示NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示出，treg按捕捉到的%-底物物。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，养成3天后来进行流式细胞膜奥义(CD25反染)和细胞膜因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者都由养成。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中的的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得出的假设是，来自加速令人满意叔父的再造无意识CD4+Treg在GITR强调中的得到了扩展和丰富，强调了再进一步研究成果Treg在1型式高血压风险个体中的的异质性的必要性。

注解注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28